肝内胆管癌（iCCA）是原发性肝癌中恶性程度极高的亚型，发病率逐年上升，且对现有治疗方案应答不佳，患者预后极差。AKT和YAP作为两条促癌通路，在iCCA中被频繁激活，然而两者在肿瘤进展中的动态调控关系、以及对肿瘤免疫微环境的协同影响一直未能被清晰阐明，这极大限制了靶向药物的开发应用。

2026年3月4日，夏威夷大学陈昕、邓友平及华中科技大学Yanhui Wu共同通讯在Journal of Hepatology 在线发表题为“Distinct molecular pathways regulated by activated AKT and YAP signaling during intrahepatic cholangiocarcinoma progression”的研究论文。该研究构建了两种多西环素诱导的iCCA小鼠模型：Akt/TRE-YAP模型和TRE-Akt/YAP模型。通过撤除多西环素，可在已形成的肿瘤中选择性抑制YAP或AKT。随后，作者进行了组织学和分子分析，以评估表型变化和通路调控情况。结果显示在Akt/TRE-YAP模型中，抑制YAP最初导致肿瘤消退，但由于持续的AKT信号，最终转化为脂肪变性肝细胞癌，同时重塑免疫抑制微环境的全新机制，为iCCA的精准治疗提供了重要理论依据。

创新性实验设计

为了精准区分AKT和YAP信号在肿瘤发生、进展阶段的不同作用，研究团队设计了极具创新性的多西环素诱导可控小鼠模型，解决了传统基因敲除模型无法在肿瘤形成后选择性抑制单通路的难题：

PART·1两种可诱导模型的构建与验证

Akt/TRE-YAP模型：AKT基因持续激活表达，YAP基因置于多西环素响应的TRE启动子调控下，仅在给予多西环素时表达激活；

TRE-Akt/YAP模型：YAP基因持续激活表达，AKT基因置于TRE启动子调控下，仅给予多西环素时激活。 两种模型均在小鼠肝脏特异性激活对应通路，均可诱导形成典型的肝内胆管癌。通过停止给予多西环素，即可在肿瘤已经形成后，选择性关闭YAP或AKT的表达，实现单通路的特异性抑制，完美满足研究需求。

PART·2动态观察与多组学分析设计

构建模型并诱导肿瘤形成后，研究团队分为三组处理：持续给药组（保持两条通路持续激活）、停药组（选择性抑制单通路）、对照组，分别在停药后1周、2周、4周、8周多个时间点收集肿瘤组织，开展动态观察：

组织形态学分析：通过HE染色、免疫组化染色，观察肿瘤细胞形态、病理分型变化，评估肿瘤消退或进展情况；

分子通路分析：通过转录组测序、蛋白免疫印迹，分析不同通路抑制后全基因组基因表达变化、通路激活状态改变；

免疫微环境分析：通过流式细胞术、免疫荧光染色，定量分析肿瘤组织中浸润的免疫细胞亚群比例、免疫检查点分子表达变化，解析通路调控对免疫微环境的重塑作用。

核心实验结果

实验结果清晰展现了选择性抑制YAP或AKT后的不同表型变化： 在Akt/TRE-YAP模型中，撤除多西环素抑制YAP信号后，停药1周即可观察到肿瘤体积明显缩小，大量肿瘤细胞发生凋亡，肿瘤出现明显消退；但随着观察时间延长，到停药8周时，残留的肿瘤细胞重新增殖，且病理类型发生了完全转变——原本典型的肝内胆管癌转化为了脂肪变性肝细胞癌，这一表型变化完全由持续激活的AKT信号驱动。 而在TRE-Akt/YAP模型中，撤除多西环素抑制AKT信号后，无论YAP是否持续激活，肿瘤始终维持消退状态，没有再次进展，也没有观察到病理类型的转化，证明持续AKT信号是肿瘤复发和表型转化的核心驱动因素。

转录组分析进一步验证了这一结果：YAP抑制后，胆管癌特征性基因表达下调，而脂肪变性肝细胞癌特征性的脂代谢相关基因、肝细胞系相关基因显著上调，完全匹配组织病理学观察结果。

免疫微环境重塑机制

该研究进一步深入解析了持续AKT信号对肿瘤免疫微环境的重塑机制，得到了清晰的调控通路：

持续AKT信号促进趋化因子分泌，招募免疫抑制细胞

研究发现，持续激活的AKT信号会上调肿瘤细胞中CCL2、CXCL12等趋化因子的表达和分泌。这些趋化因子会招募大量的巨噬细胞和髓源性抑制细胞（MDSC）浸润到肿瘤组织中：CCL2能够特异性招募巨噬细胞向肿瘤组织迁移，CXCL12则促进MDSC的浸润和保留，从细胞层面构建了免疫抑制的细胞基础。 而当AKT信号被抑制后，趋化因子分泌显著下降，巨噬细胞和MDSC的浸润明显减少，免疫抑制状态得到缓解。

持续AKT信号诱导巨噬细胞向M2型极化，强化免疫抑制

招募到肿瘤组织中的巨噬细胞，在持续AKT信号诱导下，会显著向免疫抑制性M2型极化。研究通过流式细胞术证实，持续AKT激活的肿瘤组织中，M2型巨噬细胞占比显著升高，M1型促炎巨噬细胞比例下降；M2型巨噬细胞会分泌大量IL-10、TGF-β等抗炎细胞因子，进一步抑制CD8+效应T细胞的活化和增殖，让肿瘤逃避免疫系统的杀伤。 同时，M2型巨噬细胞还会表达更高水平的PD-L1免疫检查点分子，通过PD-1/PD-L1通路直接抑制T细胞功能，进一步强化免疫抑制微环境。

YAP信号对免疫微环境的作用与AKT完全不同

研究同时对比了YAP信号对免疫微环境的调控：YAP激活主要促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，对免疫细胞浸润的调控作用较弱。当YAP被抑制后，虽然肿瘤细胞增殖减缓，但持续存在的AKT信号仍然能够完成免疫微环境的重塑，维持免疫抑制状态，让残留肿瘤细胞逃避免疫清除，最终实现复发和表型转化。

综合所有实验结果，该研究梳理出了完整的调控机制： 在iCCA发生阶段，AKT和YAP信号共同激活，协同驱动胆管上皮细胞恶性转化，形成肝内胆管癌；当YAP信号被选择性抑制后，短期之内肿瘤细胞增殖被阻断，凋亡增加，肿瘤出现消退；但由于持续激活的AKT信号依然存在，一方面会诱导残留肿瘤细胞向肝细胞系方向分化，激活脂代谢通路，最终让iCCA转化为脂肪变性肝细胞癌；另一方面，AKT信号通过上调CCL2、CXCL12等趋化因子，大量招募巨噬细胞和MDSC浸润，并诱导巨噬细胞向M2型极化，分泌免疫抑制细胞因子、上调PD-L1表达，最终构建出高度免疫抑制的肿瘤微环境，抑制效应T细胞的抗肿瘤免疫应答，帮助残留肿瘤细胞逃避免疫清除，最终实现肿瘤复发和进展。

结     语

该研究通过精妙的实验设计，清晰区分了AKT和YAP信号在iCCA进展中的不同作用，首次揭示了持续AKT信号驱动iCCA向脂肪变性肝细胞癌转化、同时重塑免疫抑制微环境的全新机制，解决了领域内长期存在的争议问题。 从临床角度来看，该研究提示，针对iCCA的治疗，不能仅靶向YAP单通路，即使YAP被有效抑制，持续AKT信号仍然会驱动肿瘤复发和表型转化，因此联合靶向AKT信号才是更优的治疗策略；同时，持续AKT诱导的免疫抑制微环境，提示联合AKT抑制剂和免疫检查点阻断治疗，可能会产生更好的治疗效果，为iCCA的联合治疗提供了明确的方向。此外，该研究发现的iCCA向肝细胞癌转化的现象，也提示临床针对iCCA治疗后复发的患者，需要重新评估病理类型，调整治疗方案，实现精准个体化治疗。

参考文献

1：https://www.journal-of-hepatology.eu/article/S0168-8278(26)00119-4

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编辑｜Zhang.ZG

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